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細胞基因組如何擴增,常見問題有哪些
加入時間:2016-06-14 09:35:29  當前新聞點擊率:2989

  基因組學已經深刻地改變了生命科學的諸多領域的面貌。目前它的主要內容是新的全基因組堿基序列的測定和在全基因組范圍內鑒定那些在不同水平上影響生命活動的基因群的功能和相互作用。為達此要求,近年出現的第二代測序(深度測序)技術和基因芯片技術發揮了關鍵作用,但是兩者都需要足夠的高質量的核酸樣品。所以,在只有或只能用單細胞或極少量細胞的情況下,如果沒有特殊手段,上述分析往往不能常規、方便地進行。細胞基因組擴增試劑盒能夠實現高度均一的全基因組擴增,這種方法是基于多次退火環狀循環擴增(MALBAC)技術,該技術首先利用獨特的具有鏈置換活性的DNA聚合酶進行準線性的全基因組預擴增,隨后通過PCR進行指數式擴增,為下游分析提供充分的實驗材料。那么細胞基因組常見問題有哪些?

  常見問題

  1.選擇的實驗材料要新鮮,處理時間不易過長。

  2.在加入細胞裂解緩沖液前,細胞必須均勻分散,以減少DNA團塊形成。

  3. 提取的DNA不易溶解:不純,含雜質較多;加溶解液太少使濃度過大。沉淀物太干燥,也將使溶解變得很困難。

  4. 電泳檢測時DNA成涂布狀:操作不慎;污染核酸酶等。

  5.分光光度分析DNA的A280/A260小于1.8;不純,含有蛋白質等雜質。在這種情況下,應加入SDS至終濃度為0.5%,并重復步驟2~8。

  6.酚/氯仿/異戊醇抽提后,其上清液太黏不易吸?。汉邼舛鹊腄NA,可加大抽提前緩沖液的量或減少所取組織的量。

  國產品牌普朗醫療生產的全基因組擴增(Whole Genome Amplification)是一種對全部基因組序列進行非選擇性擴增的技術,其目的是在沒有序列傾向性的前提下大幅度增加DNA的總量。 采用MDA(多重鏈置換擴增)的方法,能夠在16個小時之內,將ng甚至是pg級的微量DNA有效擴增至10-40μg高覆蓋度的全基因組DNA。

                         普朗全基因組擴增試劑盒

                           (普朗醫療品牌----全基因組擴增試劑盒

  產品優勢:

  高產量:ng級微量樣本經擴增后可獲得10-20μg的DNA產物(普通型);

  pg級微量樣本經擴增后可獲得30-40μg的DNA產物(高效型);

  高覆蓋度:微量基因組樣本擴增后可達95%以上的覆蓋度;

  操作簡單:單管操作、3步完成、無需純化、操作時間短;

  高保真度:所用的DNA Polymerase具有較高的保真性;

  高均一度:基于無偏好性的MDA的擴增,可實現全基因組的均一擴增,擴增產物平均片段長度大于20kb;

  設備要求低:只需無熱蓋的PCR儀或者水浴鍋就可完成整個反應。

  下游應用:

  經本試劑盒擴增后的DNA產物可用于多種下游分析平臺

  · 基因突變檢測

  · SNP基因分型

  · CNV全景圖和非整倍體檢測

  · 全基因組和外顯子測序

  · 實時定量PCR

  · 分子克隆

  · 陣列比較基因組雜交

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