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用醫療器械快速測定酶活性的注意事項
加入時間:2012-04-05 12:42:52  當前新聞點擊率:5682

    測定酶活性對于測試環境很重要,酶在很多情況下都容易失去活性,因此,如何用體外診斷試劑快速的測定酶活性顯得非常重要。如果在測定活性之前所貯的樣品酶活性有了降低,無論所用的醫療器械如何先進,也不能獲得準確的結果。在適當的條件下酶會失活,因而必須強調在收集樣品之后應盡可能快速測試酶活性,最好當天進行測定。關于酶樣品的貯存與處理應注意以下幾點:

1.酶活力測定最常用的樣品是血清或血漿。制備血漿所用的抗凝劑可抑制某些酶的活性,如EDTA能抑制ALP,草酸鹽抑制LDH,肝素對CK及某些其他酶有輕微的抑制作用,故一般樣品以血清為佳。

2.多數血清酶以較高濃度存在于紅細胞、白細胞或血小板中。因此分離血清時應注意避免溶血。

3.光照對CK活性有抑制作用,因此,主張CK測定的血清應貯存于4℃的暗處,測定時應該注意避光。

4.由于血清白蛋白對酶蛋白有穩定作用,在它的存在下,某些酶在室溫下可保存1~2天而無明顯失活。

5.有些酶由于自身的特性,在貯存時需特別加以注意。例如LDH同工酶在冰箱保存不穩定,在室溫反而穩定時間較長,所以測定LDH活力的血清樣品,應置于室溫下,2~3天內可保持穩定,不能存放冰箱過夜。

6.由于酶很容易發生表面變性,因此在操作時應避免形成泡沫。

7.巰基對于大多數酶來說是十分重要的,可能起如下幾方面的作用:①參與催化;②和底物結合;③組成變構部位;④維持酶的三級或四級結構。因此,使巰基保持天然狀態是使許多酶穩定化的最重要的條件之一,基于這個理由,在酶的活性測定、抽提、制備以及保存過程中,常可添加-SH保護劑,如半胱氨酸、谷胱甘肽、2-巰基乙醇、二硫蘇糖醇、二硫赤蘚糖醇等。
 

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