借助酶標儀測定T細胞功能
加入時間:2011-11-07 10:22:52 當前新聞點擊率:4326
1.淋巴細胞轉化試驗(lymphocyte blastogenesis test): T細胞在體外受特異性抗原(舊結核菌素等)或有絲分裂原(pHA、ConA等)刺激后,能轉化為淋巴母細胞。試驗時取外周血或分離的淋巴細胞,加入有絲分裂原或特異性抗原,在培養液中培養72小時,經涂片染色后鏡檢計算轉化百分率,并借助酶標儀于波長570nm下測吸光值作為判斷指標。正常人為70%左右,轉化率低表明細胞免疫功能下降。若在培養終止前6小時加入3H-TdR,經β液體閃爍儀檢測淋巴細胞內3H-TdR的摻入量,亦可算出轉化率。由于活的增殖細胞具有吸收四甲基偶氮唑鹽(MTT)的能力,活化的線粒體能裂解四氮唑環而產生顏色反應,MTT法簡單易行,常被一般實驗室采用。該試驗可檢測細胞的增殖和細胞毒活性。 2.淋巴細胞參與的細胞毒性試驗(lymphocyte mediated cytotoxicity test,LMC-T) 系檢測CTL的方法。當CTL再次接觸靶抗原時,在酶標儀的檢測下,即表現出破壞、溶解靶細胞的特性。這種特性稱為LMC,檢測時將受試者外周血單個核細胞(效應細胞)與傳代的51Cr標記的腫瘤細胞(靶細胞)按一定的效靶比例混合,于37℃孵育一定時間,離心后用γ計數器測定上清同位素強度,其強度與效應細胞的細胞毒性成正比。按下式計算溶解百分率作為判斷指標??赏ㄟ^測定腫瘤患者CTL對腫瘤細胞的殺傷力,判斷患者的預后和觀察其療效。 溶解百分率=(實驗組cpm-自發釋放組cpm)×100%/(最大釋放組cpm-自發釋放組cpm) 3.T細胞功能的體內測定法:在臨床上常用的方法是體內皮試法,細胞免疫功能正常者可出現硬結、紅斑等陽性反應,細胞免疫功能低下者常呈弱陽性或陰性反應。臨床上常作為某些病原微生物感染的診斷和觀察腫瘤患者的細胞免疫狀態、療效、及其預后的指標。①生物性抗原皮膚試驗:分為特異性與非特異性兩類,前者包括以結核菌素(OT)、純蛋白衍生物(PPD)及鏈激酶-鏈道酶(SK-SD)等為抗原的皮膚試驗,可以利用酶標儀檢測觀察。其中以舊結核菌素皮膚試驗應用最為普遍。定量注射上述抗原于前臂屈側皮內,24~48小時觀察結果,局部出現紅腫,硬結者(>0.5cm)為陽性。后者多用有絲分裂原如植物血凝素(PHA)作皮膚試驗,一般在注射后6~12小時局部出現紅斑、硬結,24~48小時可達高峰,硬結大于1.5cm為陽性。在特異性抗原皮試中,若受試者從未接觸過所試抗原,則多不出現陽性反應,因而往往作兩種以上抗原皮試,以對受試者的細胞免疫功能作出綜合評價。②化學性半抗原皮試:此類半抗原常用二硝基氯苯(DNCB)和二硝基氟苯(DNFB),皆系小分子物質,進入皮膚后即與組織蛋白結合,構成完全抗原并引起遲發型超敏反應。試驗時先將受試者致敏,即將1%DNCB或DNFB丙酮溶液涂于前臂皮膚,24小時后洗去并于2~3周后再以小劑量DNCB或DNFB涂于同側或對側皮膚,以24~48小時后發生紅腫、硬結醫學教|育網|收集整理、水泡或潰瘍為陽性。細胞免疫功能低下或缺陷者,常呈弱陽性或陰性反應。但由于局部反應較大,病人難以接受。 研究表明,在酶標儀的輔助下,可以更加有效的觀察、檢測淋巴T細胞的功能和相關的反應機制。 文章來源--普朗醫療網編發表,轉載請注明出處(http://www.yingfu.cc) 上一篇:
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